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              技術支持

              古朵小課堂:多色免疫熒光為什么也叫做多重免疫組化?
              更新時間:2023-12-01   點擊次數:494次

                  古朵小課堂:多色免疫熒光為什么也叫做多重免疫組化?

               

                  多色熒光免疫組化

                  多靶標免疫組化研究全套解決方案

                  多靶點標記技術旨在同一張切片上同時檢測多個靶標分子,從而進行不同靶標之間共表達和共定位分析、豐度檢測、異質性分析、細胞表型統計以及復雜的組織微環境描述等。

                  該技術是基于TSA(Tyramide Signal Amplification )酪胺信號放大技術的組織切片多重標記方案,利用辣根過氧化酶(HRP)對靶蛋白或核酸進行高密度原位標記,提高檢測的靈敏度,大幅提高信噪比甚至達千倍以上。它可使用同一動物來源的一抗,進行同一組織切片上多種marker的熒光多重標記。同時由于具有的信號放大性能,它可將信號強度完成10-100倍的信號提升,大大提高對于弱信號及不易標記的蛋白的探測靈敏度。

                  Multiplex IHC,簡稱mIHC,直譯多重免疫組化,也叫多重熒光組化、多色免疫熒光、熒光多色標記等,到底是組化還是熒光?初次接觸的人有些懵,下面就要從它的原理給大家解釋下,為什么呈現的是熒光圖像而同時我們又稱之為組化又沒錯,要想充分明白這個問題,我們從以下幾個方面來解釋:

                  1-mIHC的基本原理

                  mIHC實驗是基于使用酪胺-熒光基團檢測開發的。其實驗步驟使用序列標記策略,每輪標記包含一抗孵育和二抗孵育。隨后是酪胺-熒光基團偶聯物沉淀。接下來將抗體hrp剝離,或在微波爐或者高溫中加熱,去除樣本中的抗體,所有沉淀的熒光基團,仍與樣本共價結合。mIHC的基本原理:內源性過氧化物酶封閉--抗原修復--一抗孵育--hrp二抗--顯色(熒光顯色沉淀),由此可見,這基本就是免疫組化的經典原理;只不過mIHC重復了組化的兩次(雙標) 三次(三標)甚至六次(六標七色),后一步再做個負染dapi(類似于組化的蘇木素負染)!

                  2-為什么使用多重而非單染色IHC?

                  如果您的研究方向是探索不同細胞類型之間的交互作用,或者需要評價多個生物標志物和組織的表達或共定位,可以使用mIHC實驗。

                  3-mIHC實驗的抗體使用

                  使用經過高度驗證的抗體,確保得到可靠的結果。通常而言經過IHC-P驗證的抗體,同樣也能在mIHC中使用,但需要再進行實驗步驟優化。

                  上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區。是一家專門從事生物技術相關產品,勵志研發和銷售的綜合性生物公司,產品遠銷多個國家和地區,我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準則、以市場需求為導向,不斷開發高質量的新產品,提供客戶滿意的綜合服務質量"的方針。

               

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