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              技術支持

              古朵快訊:ELISA試劑操作常見問題及解決方案
              更新時間:2023-12-01   點擊次數:464次

                ??ELISA試劑操作常見問題及解決方案


                ??一、為什么所有試劑和檢測樣本要平衡至室溫后再進行加樣操作?

                ??溫度是ELISA結合反應的重要影響因素。為了使所有樣本在一致的溫度下反應,實驗前務必將所有試劑平衡至室溫,包括檢測樣本。避免因溫度的動力學反應差異而導致ELISA試劑盒檢測結果的不準確。

                ??二、如何獲得良好線性的標準曲線?

                ??按照推薦方式保存標準品;溶解標準品之前需短暫離心,收集粉末;確保標準品溶解和混勻(大約10min),然后再進行后續的系列稀釋步驟,確保每一步都充分混勻且移液;顯色的恰當終止;選擇合適的數學擬合方程繪制標準曲線。

                ??三、ELISA實驗為什么必須設置復孔?

                ??為獲得準確的實驗結果,強烈建議標準品及樣本進行復孔檢測。因為復孔檢測可以:

                ??計算平均值,確保實驗結果準確;解決實驗中誤操作造成的跳孔現象;

                ??計算CV值,對實驗的操作和試劑盒的度進行評估。

                ??四、為什么實驗過程中孵育、洗滌需要振蕩?如何振蕩?

                ??振蕩孵育使反應充分,振蕩洗滌使背景干凈。建議使用酶標專用96孔微孔板振蕩器。

                ??孵育過程振蕩,可以加快、加強抗原抗體分子間的相互碰撞接觸,使得反應過程加,OD值通常會比未振蕩孵育的結果要高;洗滌過程振蕩,可以使洗板干凈,在很大程度上 能降低背景值,同時可以提高試劑盒檢測的靈敏度。

                ??五、何時終止ELISA反應?

                ??ELISA實驗終需要酶催化底物顯色反應來完成,在佳時間終止反應是ELISA試劑盒實驗成功的重要因素。在HRP-TMB酶促反應系統中,S5出現淡藍色,S1 – S3有明顯的階梯型藍色,便需要終止反應;或者根據高濃度標準品孔在620nm的OD值來決定,OD620=0.9-0.95之間時即可終止。

                ??六、為什么酶標儀讀數時必須選用雙波長?

                ??首先,酶標儀使用前務必預熱10-15min,使測讀結果穩定。其次,ELISA實驗采用雙波長測定吸光度,可以排除單波長檢測時的測定干擾(標本的濃度,干擾色等)。一般采用大波長作為參照波長,在參照波長下,檢測物的吸光值小,檢測波長和參照波長的吸光值之差可以消除非特異性吸收;因此,雙波長測定,可大限度的消除指紋、雜質及不透光的物質對酶標儀讀數帶來的誤差,以保證實驗數據的準確度。

                ??ELISA試劑 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區。是一家專門從事生物技術相關產品,勵志研發和銷售的綜合性生物公司,產品遠銷多個國家和地區,我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準則、以市場需求為導向,不斷開發高質量的新產品,提供客戶滿意的綜合服務質量"的方針。

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